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首頁-技術文章-多肽裂解儀正確使用過程

多肽裂解儀正確使用過程

更新時間:2025-08-07      點擊次數:309
  多肽裂解儀是分析多肽序列和結構的關鍵設備,其正確使用過程涉及樣品制備、儀器參數設置、數據采集與解析等多個環節。以下是詳細的操作流程及注意事項:
  一、多肽裂解儀實驗前準備
  1. 樣品制備要求
  純度控制:確保多肽樣品純度>95%,避免雜質干擾信號。若為混合物,需先進行分離純化(如反相色譜法)。
  溶劑選擇:推薦使用揮發性緩沖液,避免非揮發性鹽類殘留導致離子源污染。對于難溶樣本,可加入少量有機溶劑助溶。
  濃度優化:調至理想進樣濃度范圍,過低會導致信號弱,過高則可能引起離子抑制效應。可通過預實驗梯度稀釋確定最佳濃度。
  還原烷基化處理:若樣品含二硫鍵,需用DTT或TCEP還原,再用碘乙酰胺烷基化以防止復性。
  2. 標準品配置(定量分析時必需)
  配制系列濃度梯度的標準曲線溶液,用于絕對定量方法的開發與驗證。注意避光保存并標注失效日期。
  二、多肽裂解儀儀器開機與初始化
  1. 啟動順序
  依次打開氮氣發生器→質譜主機電源→計算機控制系統→真空系統(渦輪分子泵需預熱三十分鐘達到穩定轉速)。
  關鍵指標監控:待真空度降且分子泵運行平穩后方可繼續操作。
  2. 離子源調試
  ESI源參數優化:毛細管電壓設為3.5kV左右,干燥氣流速調整,鞘氣流輔助脫溶劑。通過觀察實時總離子流圖(TIC)判斷噴霧穩定性——理想的錐孔電壓應產生連續穩定的Taylor錐形態。
  納升噴霧模式適用場景:當樣本量極少時采用納噴針,此時需精細調節注射泵流速。
 

 

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